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睿捷生物

Real-gen Biotechnology

服務熱線:4008299200

新聞資訊 NEWS
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江蘇睿捷生物科技有限公司

地址:蘇州工業園區新平街388號A2-1003室

電話:0512-6558 5482 (蘇州)

電話:025-5223 0375 (南京)

電話:0531-5553 0809 (濟南)

郵編:215000

郵箱: sales@realgen-bio.com

新聞中心

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2019-11
13


原創:STEMCELL

STEMCELL TECHNOLOGIES很高興向您宣布推出STEMdiff? 神經嵴分化試劑盒(#08610)。該試劑擴充了STEMCELL神經產品系列,鞏固了我們在支持hPSC向神經分化研究方向的領先地位。

優勢:

l快速:簡單的單層培養流程,僅需6天即可生成神經嵴細胞;

l高效:在已分化的細胞中,多能神經嵴細胞達70%以上;

l多能:生成的神經嵴細胞可繼續分化為周圍神經元、軟骨細胞或成骨細胞等;

l 通用:與在mTeSR?1, mTeSR? Plus, or TeSR?-E8?中維持培養的多能干細胞均可兼容。

STEMdiff神經嵴分化試劑盒可誘導人多能干細胞向神經方向分化:

l 神經嵴誘導試劑盒能生成多潛能的神經嵴細胞(NCCs) ——此類細胞具有部分中胚層特性和部分外胚層特性;

l神經嵴細胞的特征并不明顯 ——NCCs具有多分化潛能,可通過是否具備分化成下游多種類型細胞的能力來鑒定NCCs;

l 我們的產品生成的NCCs純度高于任何自配配方 ——能用于神經嵴生物學的研究;使下游分化更便捷。

多潛能神經嵴細胞可分化成以下細胞:

l感覺神經元

l施萬細胞

l腸神經元

l顱面部神經元

l黑色素細胞

l 成骨細胞

l軟骨細胞

目標客戶:

l做神經嵴研究的實驗室:使用PSC生產神經脊或做神經脊生物學研究的實驗室。包括通過干細胞研究發育生物學的實驗室。這些實驗室具有最直接的銷售機會。

l做感覺神經元和疼痛研究的實驗室:

大多數的神經元細胞系都不適合用于研究持續性疼痛的機制。目前最常用于疼痛研究的神經元細胞系是SH-SY5Y和兩個背根神經節雜交瘤細胞系(F-11 、 ND7/23)。這些細胞系都不表達TRP離子通道、鉀離子通道、電壓依賴性鈉離子通道的基因,這些離子通道在疼痛調節中都非常重要。

動物模型沒有人類相關性,對藥理學研究至關重要。雖然來自于嚙齒類動物背根神經節(DRG)的原代感覺神經元和人周圍感覺神經元不同,但兩者表達類似的離子通道基因,普遍認為這是研究周圍神經系統(PNS)持續性疼痛最合適的細胞模型。但是需要把動物殺死。

做疼痛研究或者相關受體研究的實驗室,可以先使用STEMdiff神經嵴分化試劑盒得到神經嵴細胞,再生成感覺神經元。

l其他實驗室:

先天性巨結腸病——神經嵴來源的腸神經元未正常分布,導致腸蠕動和腸動力缺失;

唇腭裂——常見顱面部發育失調 ;特雷徹·柯林斯綜合癥——顱面部發育失調的一種 ;

神經纖維瘤病I型——1/3000人患有這種神經腫瘤 ;

成神經細胞瘤——在全身和皮膚表面神經上生長的腫瘤;

黑色素瘤——神經嵴黑素細胞皮膚癌;

外周神經痛——神經嵴細胞是感覺神經元和周圍神經系統的前體。

交叉銷售機會:

lBrainPhys?:

研究人員可以考慮把基礎培養基Neurobasal,換成更好的維持神經元活性的培養基,BrainPhys?。

l神經添加劑:

SM1和N2A。無論是培養原代神經元還是從PSC誘導到神經元,在培養過程中均需添加神經添加劑。SM1優化自B27,在自配體系中可以直接替代B27。如果發現神經元成熟度或神經突觸外觀有變化,則應嘗試對SM1和B27進行一些比較測試。

lSTEMdiff?腸類器官試劑盒:

很多客戶對腸道神經元和腸類器官的共培養感興趣。STEMdiff?神經嵴分化試劑盒誘導形成的神經嵴細胞可繼續分化成腸道神經元,與STEMdiff?腸類器官試劑盒配合使用,可進行先天性巨結腸等疾病的研究。

lMesenCult?-ACF Plus:

使用MesenCult?-ACF Plus培養基培養,神經嵴細胞可傳代3次。想繼續往中胚層下游分化的客戶,需要使用MesenCult?-ACF Plus培養基來擴增神經嵴細胞。

lMesenCult?-ACF軟骨分化試劑盒、MesenCult?-ACF成骨分化試劑盒、MesenCult?-ACF成脂分化試劑盒:適用于想做這些下游分化的客戶。

資源:
hPSC-Neural Brochure (page 7)
Pain Research Forum – 關于疼痛研究的網頁信息
產品報價:

產品名稱

貨號

組分

價格

STEMdiff? Neural Crest Differentiation Kit

#08610

250 mL Neural Induction Medium Basal (#05835)

500 μL Neural Crest Differentiation Supplement (#08611)

4200元



2019-11
13

原創 STEMCELL

STEMCELL TECHNOLOGIES很高興您宣布推出三個新的EasySep?試劑盒,這是STEMCELL在非人靈長類(NHP)的第一批成品(OTS)的細胞分選產品。 我們以前將這些分選試劑盒作為定制產品提供,現在將它們作為成品提供,為使用非人靈長類樣本的客戶提供更多的便利。

產品信息

產品名稱

貨號#

正裝

RoboSep?

試用裝

EasySep? Non-Human Primate T Cell Isolation Kit

19581

19581RF

19521

EasySep? Non-Human Primate CD4+ T Cell Isolation Kit

19582

19582RF

19522

EasySep? Non-Human Primate CD8+ T Cell Isolation Kit

19583

19583RF

19523

產品描述

這些產品在不過柱的情況下,可在短短20分鐘內從新鮮或冷凍的非人靈長類的PBMC中分離出T細胞亞群。

產品規格

正裝包含1管抗體混合物和2-3管EasySep?磁珠(#19250),正裝可處理1 x 10^9個細胞。試用裝可處理3 x 10^8個細胞。

產品優勢

快速、無柱:20至25分鐘,比Miltenyi產品快2-3倍;

簡單: 沒有上游清洗步驟,只需一個抗體混合物;

沒有生物素:與下游實驗的一致性和兼容性更高;

方便:客戶現在可以更快、更簡單的訂購這些成品試劑盒,而不需要走定制流程。

產品性能和競品情況


STEMCELL

EasySep? Non-Human Primate Cell Isolation Kits

Miltenyi

Non-Human Primate Cell Isolation Kits

物種

恒河猴和食蟹猴

恒河猴和食蟹猴

樣本來源

PBMC

PBMC

操作時長

20 - 25分鐘

50分鐘以上

純度(% ± StdDev)

Pan-T   :94.6 ± 3.4%

CD4+ T:84.5 ± 3.3%

CD8+ T:89.2 ± 3.5%

未經內部測試

注意

使用 D磁珠 (19250)

使用生物素標記的抗體

磁極兼容性

EasySep?非人類靈長類T、CD4+T、CD8+T細胞分選試劑盒可兼容磁極:

EasySep?磁極;

“The Big Easy”EasySep?磁極;

RoboSep?-S。

要使用EasySep?其他磁極分選非人靈長類免疫細胞,請聯系PSS

技術要點

樣本來源PBMC樣本上已經過優化,從以前的定制情況上看,這些試劑盒在定制時也已成功用于淋巴結和脾臟樣品。

樣本準備

對于超過 24小時的外周血樣本,在細胞分選之前需要用氯化銨裂解紅細胞;

對于凍存的PBMC,在細胞分選之前,需要對樣本進行DNAse I處理并過濾;

對于小體積樣本,建議使用標準的15 mL錐形管(#38009),而非SepMate?,以提高PBMC的回收率;

分離PBMC時,Lymphoprep?的濃度因物種而異:

恒河猴,使用100%濃度Lymphoprep?;

食蟹猴,使用D-PBS(不含Ca ++和Mg ++)將Lymphoprep?稀釋至90%,以減少單個核細胞層的紅細胞和粒細胞污染。

流式細胞染色和設門注意事項

由于存在紅細胞殘留,因此需要使用CD45抗體(特別是克隆號D058-1283)(強烈建議)

還需要使用細胞活性染料(強烈建議)

目標市場

工業和科研在使用非人類靈長類動物模型研究的免疫學研究領域,包括:

傳染?。ɡ绨滩《?/span>/艾滋病,結核病,黃熱?。?/span>;

自身免疫性疾病,尤其是需要縱向研究的慢性疾?。ɡ缍喟l性硬化);

移植;

免疫治療;

毒理學。

交叉銷售

實驗流程

產品名稱

貨號 #

細胞處理

Ammonium Chloride Solution

07800

DNase I Solution

07900

37 μm Cell Strainer

27250

SepMate?-50

86450

Falcon®? Conical Tubes,15 mL

38009

Lymphoprep?

07801

D-PBS (Without Ca++ and Mg++)

37350

細胞分選

EasySep? Buffer

20144

RoboSep? Buffer

20104

5 mL (12 x 75 mm) polystyrene round-bottom tubes

38007

14 mL (17 x 95 mm) polystyrene round-bottom tubes

38008

細胞分析

Anti-Human CD4 Antibody, Clone OKT4

(cross-reacts with select non-human primates species)

60016

Anti-Human CD8 Antibody, Clone SK1

(cross-reacts with select non-human primates species)

60022

市場宣傳材料和銷售支持

手冊:免疫學工具手冊;

宣傳單:非人類靈長類細胞分選;

網站:EasySep?(常規)分選定制。

產品目錄價

貨號#

名稱

規格

目錄價

19581

EasySep? Non-Human Primate T Cell Isolation Kit

1 kit

20204

19582

EasySep? Non-Human Primate CD4+ T Cell Isolation Kit

1 kit

20204

19583

EasySep? Non-Human Primate CD8+ T Cell Isolation Kit

1 kit

20204

2019-11
05


原創: STEMCELL

阿爾茨海默?。?span>Alzheimer's disease,AD)是最常見的神經退行性疾病。Alzheimer's associationAAIC)的數據顯示:

l AD是美國排名第六的致死原因。

l AD患者的看護需要大量的精力,也給家庭帶來了巨大的經濟負擔。

l 2000-2017年間,死于心臟疾病的患者下降了9%,而死于AD的患者增加了145%。

l 3個老年人中就有1個死于AD或者另外一種癡呆(dementia)。

l 2019年,ADdementia在美國預計的花費為2900億美金,這個數字預計會在2050年到達11000億美金。

l 2019年,美國AD患者的人數在580萬,這個數字預計在2050年到達接近1400萬。

*數據來源:2019 Alzheimer's Disease Facts and Figures Report

引起AD的原因目前尚未明確,疾病發展目前認為與大腦中的Beta-AmyloidTau蛋白有關,近期也有研究認為大腦中的免疫細胞 - 小膠質細胞可能介導了Tau蛋白聚集。目前AD的研究工具包括原代神經元,轉基因動物模型,3D腦類器官等。

3D腦類器官

靈長類動物的大腦是高度復雜和有組織性的結果,2D的原代神經元模型包括hPSC衍生的神經元模型重現腦組織復雜結構的能力較為有限,而嚙齒類動物(包括小大鼠)與靈長類動物的大腦相比結構更加簡單(不含有OSVZ區域)。hPSC衍生的腦類器官則是一種三維(3D)體外培養系統,能夠重現人腦發育過程和發育中的人腦結構。它們提供了一種模擬人體生理環境的體外模型,專用于研究人神經系統特有的神經發育和疾病過程。

而從FAD和一些SAD病人的iPS衍生的神經元具有Tau蛋白的磷酸化水平升高和Beta-Amyloid聚集,從AD病人來源的3D腦類器官也同時具有Beta-Amyloid的聚集和類似neurofibrillary tanglesTau磷酸化水平升高。因此,近期也有很多科學家使用3D腦類器官進行AD的相關研究。

STEMdiff?腦類器官試劑盒為無血清培養系統,用于從人ESiPS生成腦類器官。它是基于由Madeline LancasterJürgen Knoblich教授所發布的配方1。

圖一

1. 使用STEMdiff?腦組織類器官試劑盒生成的腦組織類器官

A)使用STEMdiff? 腦組織類器官試劑盒在第40天生成的整個腦組織類器官的相位對比圖。箭頭所指處為皮層類似區域。(B)免疫組化分析結果顯示這些皮層類似區域具有頂祖標志物PAX6(紅色)和神經標志物β-tubulin III(綠色)。(C-F)(B)圖框內區域的放大圖像。(CPAX6 (紅色) / β-tubulin III (綠色)。(D CTIP2 (紅色) / β-tubulin III (綠色)。(E)和(FKi-67(綠色)和核染料DAPI(藍色)共同標記的增殖中的組細胞。(F)室下區類似區域可見一個額外的Ki-67+細胞群。比例尺=A1 mm,(B500 μm 和(C-F200 μm。在培養腦類器官時,與那些未經質控的自配試劑相比,該試劑盒顯著提升了類器官(包括從難分化的細胞系)形成的效率(圖2)。

圖二

A)圖2. 與使用未經質控的試劑所生成的腦類器官相比,使用STEMdiff?腦類器官試劑盒生成的腦類器官在質量、產量和標志物表達上的表現都更為優異。

A)使用STEMdiff?腦類器官試劑盒生成的腦類器官,在第40天發展出厚組織樣結構,且直徑超過 1 mm。(B)使用未經質控的試劑生成的類器官在第40天并未發育出厚組織,而是形成了較大的含液胞囊。(CRT-qPCR分析顯示,在使用STEMdiff?腦類器官試劑盒所生成的腦類器官中,神經祖細胞與成熟神經元出現上調;(D)對比之下,采用未經質控的試劑生成的類器官顯示出較差的神經元標志物表達(平均數 ± SEM,每個細胞系的n = 2;每個分析涉及6個類器官)。數據以18S/TBP為標準,并與未分化的hPSC對照組相比較。(A)和(B)的比例尺 = 1 mm

已使用腦類器官進行造模的疾病有:

l 小頭畸形2

l ZIKA病毒誘導的小頭畸形3-6

l 可卡因的作用7

l 自閉癥譜系障礙/提摩西綜合癥8

l 阿爾茨海默病9

l 小膠質瘤10

l Miller-Dieker綜合癥11-12

如何從人多能干細胞生成腦類器官?

如何從人多能干細胞生成腦類器官的詳細操作步驟,包括類胚體的形成、神經誘導、神經上皮擴張和類器官的成熟(圖3)。

圖三

3. 腦類器官生成示意圖

將在mTeSR1?中維持培養的人多能干細胞(胚胎干細胞或誘導多能干細胞)使用溫和細胞解離試劑(GCDR)解離為單細胞懸液,以密度為9000細胞/孔接種至U-Bottom 96孔超低粘附培養板(Corning®)中,接種培養基為EB形成培養基 + 10 μM Rho-kinase抑制劑(ROCKi)。每隔2天更換為不含ROCKiEB形成培養基。5天之后,將EBs轉移到含有誘導培養基的24孔超低粘附培養板(Corning®)中。對EB培養2天后,使用液體Matrigel®(減少生長因子,Corning®)包被EBs。接下來將它們轉移到經過無組織培養處理的6孔板(12-16類器官/孔)中。嵌入的類器官在擴張培養基中維持培養3天。在第10天時,將類器官轉換到成熟培養基中,然后放置在RPM57-95的定軌搖床(Infors HT)上對其進行培養。在成熟培養基中,每3-4天進行換液。在第40天時,類器官進行RT-qPCR分析或冰凍切片后進行免疫染色。EBs形成、誘導和類器官擴張的比例尺 = 300 μm。類器官成熟的比例尺 = 1 mm。

原代神經元培養
標準化的神經元培養添加物(如Brewer's B27)包含了多種復雜的成分13-15。這些原料及相關制造過程的質量差異性都將導致該添加物的品質的變化,已有報道表明該情況會對神經元培養造成負面影響15,16。

圖四

NeuroCult? SM1STEMCELL優化后的)是根據已發表B27配方1開發設計的,且經過優化,對于支持成熟神經元的培養具有更出色的一致性(圖4)。NeuroCult? SM1神經元培養基添加物的設計和生產均為培養出可重復的、高品質的培養物做了充足的準備。在開發過程中,我們首先對已發表的添加物進行了多因素實驗13,14,確定NeuroCult? SM1的配方和原料的精確規格。精選的原料由可靠的供應商提供,并選用適當的重組或合成原材料作為組分的替代物。隨后,建立最佳的制造工藝來生產這些多組分添加物。

圖4

4. 使用SM1培養體系培養的大鼠原代神經元具有突觸前和突觸后標志物的表達

SM1培養體系中培養的E18大鼠原代皮層神經元。在培養第21天,神經元表型成熟,具有廣泛的樹突棘表達和樹突前標志物synapsinA,C;綠色)和樹突后標志物PSD-95A,B;紅色)的表達和分布。Synapsin集中在神經元胞體和軸突上分散的小突分布,軸突由MAP2A,D;藍色)標記。

與競品(添加有B27Neurobasal®)相比,SM1培養系統中具有更多β-微管蛋白III陽性表達的神經元,細胞活力顯著提升(圖5),并且SM1批次間的穩定性要更好。另外,我們發現神經元在添加有SM1的培養基中具有更多的神經突生長/分支,以及正常的電生理特征(實驗數據未顯示)。

圖五

5. SM1培養體系可大大提高細胞存活率

A)在SM1培養體系或競品體系(添加有B27Neurobasal®)中培養21天的E18大鼠原代皮層神經元。在SM1體系中培養的神經元數量顯著性高于競品體系(n=4;mean ± 95% CI;*p < 0.05)。(B)在添加有SM1B27類似競品(競品1,2,3)的Neurobasal®中培養21天的E18大鼠原代皮層神經元。使用SM1培養的神經元數量與競品相當,但批次間的穩定性較高。

產品

貨號

NeuroCult? SM1

#05711

NeuroCult? SM1 Without Vitamin A

#05731

NeuroCult? SM1 Without Antioxidants

#05732

NeuroCult? SM1 Without Insulin

#05733

想做神經元的電生理實驗?您需要BrainPhys?神經元培養基。

Do your neurons fire together?

6. BrainPhys?完全培養基(BP)、Neurobasal®完全培養基(NB)、突觸抑制劑(BP+抑制劑)和咖啡因(BP+咖啡因)條件下培養的神經元的平均連接率。

n=3(每個條件下進行了3次獨立的細胞實驗);one-way ANOVA,F(3,8) = 854,P<0.0001,使用Tukey's multiple comparisons檢驗:ns=不顯著,????P < 0.0001。圖片引用自Saber WA et al. (2018) All-Optical Assay to Study Biological Neural Networks. Front. Neurosci. 12:451. doi: 10.3389/fnins.2018.00451的圖4D。遵循CC BY 4.0. Copyright © 2018 Afshar Saber, Gasparoli, Dirks, Gunn-Moore and Antkowiak。

參考文獻

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2. Lancaster MA et al. (2013). Nature 501(7467): 373-9.

3. Wells MF et al. (2016). Cell Stem Cell 19(6): 703-8.

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6. Dang J et al. (2016) Cell Stem Cell 19(2): 258-65.

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13. Brewer GJ et al. (1993) J Neurosci Res. 35(5): 567-76.

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15. Chen Y et al. (2008) J Neurosci Methods 171(2):239-47.

16. Cressey D. (2009) Nature 459: 19.

2015-10
16
公司以”睿智、便捷、專業”為中心價值,經過三年的快速發展,現已成為LifeTech Service等國際品牌的一級代理。我們努力將睿捷生物打造成專業的生命科學研究產品供應商,成為眾多研究者們可以信賴的選擇。
2013-07
24
    

廠商

貨號

名稱

規格

促銷價

Miltenyi

130-092-410

human  CD11C  FITC

100T

2349

Miltenyi

130-090-901

CD123 antibodies, human APC

100T

2591

eBioscience

12-0409-42

anti-human CD40 PE 5C3 100 tests

100T

1576

Miltenyi

130-098-177

human HLADR   PE

30T

161

Miltenyi

130-093-014

human  Anti-FoxP3 PE

100T

3314

Miltenyi

130-098-160

human CD4  FITC

30T

124

eBioscience

15-0259-42

anti-human CD25 PE-Cy5 BC96

100T

1521

Miltenyi

130-097-958

mouse CD4      FITC

30T

124

eBioscience

15-0251-82

anti-mouse CD25 PE-Cy5 PC61.5

100 ug

1864

Miltenyi

130-091-041

CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, mouse


3298

Miltenyi

130-091-837

Mouse IgG2a-FITC 同型對照

100T

1140

Miltenyi

130-092-216

Mouse IgG2b-FITC  同型對照

100T

1140

Miltenyi

130-091-836

Mouse IgG2a-APC  同型對照

100T

1300

Miltenyi

130-091-835

Mouse IgG2a-PE  同型對照

100T

1280

millipore

 DPP4-010

DPP IV Inhibitor 同型對照

10ml

1926

Miltenyi

130-098-023

Anti-NKp46-APC, mouse

30T

230

Miltenyi

130-098-085

CD11b-FITC, human and mouse

30T

124

Miltenyi

130-098-070

CD14-APC, human

30T

301

eBioscience

11-4031-85

Rat IgG2b K Isotype Control FITC

500 ug

1576

eBioscience

85-15-4714-81

Mouse IgG1 K Isotype Control PE-Cy5 同型對照

50 ug

784

Liankebio

LK-AP101-100

Annexin V FITC

100T

864

Miltenyi

130-098-574

Anti-GITR-APC, human

30T

301

eBioscience

85-BMS607/3

Mouse TNF-alpha Platinum ELISA

96T

2800

Miltenyi

130-098-162

CD3-FITC, human

30T

124

Miltenyi

130-098-075

CD8-PE, human

30T

160